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甜菊糖苷的含量测定方法的科普知识

2015-6-13 09:09| 编辑: 谢志文|阅读: 2679| 评论: 3 |分享给好友

导读:甜菊糖苷测定方法有多种,常用的有气相色谱法、蒽酮比色法,此外国内外报道有高效液相色谱法、流动注射化学发光法、薄层法等。液相色谱法快速、准确,一般一个样品只需10min左右,其灵敏度也远远超过化学分析法,但 ...
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  • 引用 谢志文 2015-6-13 09:09
        经国内外药理实验证明,甜菊糖苷为非致癌性物质,无毒无副作用,食用安全。日本有关科学机构和科学家就甜菊糖苷的安全性问题进行过大量的研究和试验,结果是无致畸、致突变及致癌性,摄入以后以原型经粪便和尿中排除。其安全性已得到国际FAO/WHO等组织的认可。其LD50>15.0g/kg,ADI无特殊规定。

        甜菊糖是目前世界已发现并经我国卫生部、轻工业部批准使用的最接近蔗糖口味的天然低热值甜味剂,是继甘蔗甜菜糖之外第三种有开发价值和健康推崇的天然蔗糖替代品,被国际上誉为“世界第三糖源”,在GB2760-2011中允许按生产需要适量使用。

        甜菊糖苷测定方法有多种,常用的有气相色谱法、蒽酮比色法,此外国内外报道有高效液相色谱法、流动注射化学发光法、薄层法等。

    1.气相色谱法
        在强酸条件下将甜菊苷的主要成分甜菊甙(stevioside)和甜菊双糖苷A(rebaudiosideA)水解成酸基异甜菊醇(isosteviol),同时在酸性溶液中,配糖基又与甲醇反应生成异甜菊醇(isosteviol)甲酯,它经三甲基硅醚化试剂处理后,注入色谱仪进行定量测定。

        称取甜叶菊干叶和碳酸钙,移入烧杯中,加水,搅拌混合,于室温下放置过夜,过滤,加入水,用相同方法再抽提1次。然后用水分3次冲洗烧杯,过滤漏斗等,将提取液合并,顺次通过阳离子交换树脂柱和阴离子交换树脂柱。把滤液在磨口瓶内减压浓缩至干,再加甲醇,在水浴上回流,过滤后将滤液减压浓缩至干,再加入二噁烷回流,然后再加入甲醇,减压干燥后,再用硫酸甲醇在水浴上加热回流,过滤减压干燥,残渣用乙醚提取3次,合并乙醚层,用水洗后,再把乙醚挥干,加入氯仿(含黄体酮),振摇抽提,静置后吸取上层清液,置于一带尾管的磨口瓶中,内放一些玻璃棉,其上放入无水硫酸钠的适当玻璃管。

        每个操作环节都必须小心;标准品的纯度以及本法的回收率可根据实验和仪器操作,在样品计算时计算在内。

    2.蒽酮比色法
        将烘干的甜叶菊经几次热水抽提后,用硫酸铝沉淀脱色,再经水饱和的正丁醇萃取,浓缩得到除去色素和其他杂质的甜菊昔。在强酸性和加热条件下,甜菊苷和蒽酮作用生成绿色络合物,其颜色的深浅与样品中甜菊苷含量成正比关系,以甜菊苷标准作对照,可以求出样品中总的甜菊苷的含量。

        称取经干燥粉碎的甜菊叶片,置于烧杯中,加水,在沸水浴中浸提,过滤于容量瓶中,将残渣加水后,再在沸水浴中加热浸提,将浸提液过滤于容量瓶中,如此反复3一4次,收集滤液于容量瓶中,用水定容。吸取过滤液,置于烧杯中,加入硫酸铝,溶解后用氢氧化钠调至pH=7,放置1h。然后将其过滤于分流漏斗中,并用少量水洗涤滤纸及黄色沉淀物,用水饱和正丁醇萃取过滤液3次,弃去水层,合并正丁醇提取液于回收旋转浓缩装置中,减压回收正丁酸至底瓶恰好蒸干为止。用水将瓶内的甜菊苷经多次冲洗移入容量瓶中,最后用水定容至刻度,摇匀,备用。

        蒽酮硫酸溶液加入到样液或标准液时,最好把试管放入冰浴中,用环形玻璃棒在样液中不断搅拌,使作用液均匀地冷却。样液必须清澈透明,呈不同的深浅绿色,加热后不应有蛋白质沉淀存在。本法检出线为20.0一100.0μg。在操作过程中,加入蒽酮硫酸的浓度和量,以及加热时间前后要一致才能取得正确结果。同时本法与气相色谱法对比,回收率达80%以上,而操作时间可以大大地缩短。

    3.几种方法的比较
        气相色谱法定量准确,但操作过程复杂,时间长,样品中甜菊糖苷的提取涉及多种有机溶剂。而蒽酮相对操作时间短,但回收率比气相色谱法低。此外,甜菊糖普还可以采用重量法、液相色谱法、薄层色谱法等法检测。其中,重量法简单易行,但具有操作条件差,分析过程冗长,分析结果平均相对偏差大,重现性差等缺点;液相色谱法快速、准确,一般一个样品只需10min左右,其灵敏度也远远超过化学分析法,但其缺点是必须有标样。薄层色谱法能准确地进行定性定量分析,尤其是对甜菊苷进行定性分析可以说是最简单的快速分析方法。它不要求对样品进行仔细处理,设备也很简单,适合一般单位采用,但定量分析则不够精确。

        食品基质条件复杂,且食品中的甜味剂常多种同时使用,因此应研究适合所有食品中甜菊糖苷及能同时测定多种甜味剂的检测方法。



  • 引用 stevioside 2015-6-13 09:47
    HPLC
  • 引用 hahaemail 2018-5-28 23:36
    加油啊!

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